研究揭示了“相對稀缺性”現象在腫瘤細胞免疫逃逸中的作用，指出稀有的播散性腫瘤細胞(DTCs)與內源性的抗原特異性T細胞之間的交互頻率過低導致DTC無法被清除。然而，通過增強這兩類細胞之間的交互次數，如采用T細胞免疫療法，能夠實現對DTC的消除。

　　這些療法包括T細胞疫苗接種或利用基因工程改造的T細胞(如TCR-T細胞或CAR-T細胞)進行移植。實驗表明，每種方法都能有效消除DTC，從而激勵研究人員尋找可用于T細胞免疫療法針對DTC的MHC限制性和非限制性抗原。

　　根據描述乳腺癌治療后遠處轉移的發生，指出DTCs的存在與其關聯以及對患者生存的影響。由于DTCs逃避免疫監視的具體機制不明，本研究旨在理解其如何避開抗腫瘤T細胞識別。

　　DTCs免疫逃逸機制探討

　　? 盡管DTCs下調MHC I表達，但它們仍可被常規T細胞識別。

　　? 發現DTCs和內源性抗原特異性T細胞間的稀少互動是導致DTC持久存在的原因。Goddard等人揭示了一種之前未被充分認識的免疫逃逸形式，稱為“相對稀缺”，這是導致DTC持久存在背后的原因。發現T細胞為基礎的免疫療法能增加DTC與抗原特異性T細胞之間的交互頻率，從而促進DTC耗竭。通過實驗數據分析，隨著轉導了特定抗原表達載體的T細胞(如JEDI T細胞)劑量的增加，殘存DTC與其最近的JEDI T細胞之間的平均距離減小，這進一步支持了DTC免疫逃逸可能主要是由于特異性T細胞數量不足的觀點。

　　此外，利用T細胞疫苗系統(Tvaccine)誘導內源性CD8+ T細胞針對感興趣的抗原進行擴增，也證實了提高這些抗原特異性T細胞的數量可以更有效地消除DTC。因此，導致DTC持久存在的原因是其與抗原特異性免疫細胞間的交互頻率低，這一現象被稱為“相對稀缺”。

　　? 探討了多種T細胞免疫療法如何增加這兩種細胞間交互次數并消除DTCs。??

　　為了克服DTCs與內源性抗原特異性T細胞之間稀少的互動問題，文章通過實驗采用了一種T細胞免疫療法。首先，研究人員在體外模擬了微血管龕(MVN)，這種環境能夠使乳腺癌細胞進入靜息狀態并表現出類似于體內DTCs的MHC I分子下調水平。接著，將表達NY-ESO-1抗原的T4-2細胞與HLA-A2/NY-ESO-1特異性TCR-T細胞共培養。盡管T4-2細胞的MHC I表達有所下調，但添加的TCR-T細胞仍能有效消除高達84%-97%的NY-ESO-1+ T4-2細胞。

　　隨后，在小鼠體內實驗中，研究者使用了IV接種Balb/c小鼠的方法，注射了表達eGFP和流感病毒血凝素(HA)的同基因D2.0R鼠乳腺腫瘤細胞，HA可以被Clone 4(CL4)小鼠的TCR轉導CD8+ T細胞識別為模型MHC限制性腫瘤新抗原。通過向小鼠體內轉移CL4 TCR-T細胞，結果顯示顯著清除了肺部的D2.0R DTCs，平均剩余數量僅2.92個，清除率達到了82.5%-90%。

　　綜上所述，T細胞免疫療法通過向體內引入腫瘤特異性TCR-T細胞，即使在DTCs表達較低水平MHC I的情況下，也能有效地識別并清除這些腫瘤細胞，從而成功克服了DTCs與內源性抗原特異性T細胞之間稀少互動的問題。

　　實驗結果與分析

　　? 在免疫健全的小鼠模型中，即使存在有效的抗腫瘤免疫反應，DTCs仍然存在。這暗示了DTCs可能通過如下調MHC I類分子表達等方式逃避T細胞識別和清除。

　　? DTCs并未因MHC I下調解鎖T細胞介導的清除，而持續存在的T細胞功能正常且具有殺傷能力。

　　? 證實了兩種不同的模型中DTCs均能逃避強烈的適應性抗腫瘤免疫應答，并提出可能的逃逸機制(如MHC I下調節、分泌免疫抑制性細胞因子等)。??

　　基于轉錄組學的研究發現

　　? 對D2.0R DTCs/micro-metastases及對照樣本進行了轉錄組測序，未發現顯著差異的免疫相關基因表達模式。

　　? 指出DTCs可能通過不同于腫瘤團塊中靜息細胞的方式逃避免疫攻擊。

　　轉錄組學研究表明，D2.0R DTCs與D2A1細胞相比，主要在以下幾個方面表現出不同：①D2.0R細胞顯示出Ki-67陰性特征，主要以單個DTCs或微轉移灶的形式存在，而D2A1細胞則更傾向于形成轉移灶并誘導更多的Ki-67陽性的病變。?②在評估與抗原加工和呈遞、免疫抑制性細胞因子、檢查點分子相關的預編纂基因集合時，兩者的表達差異無顯著性(p > 0.10)。?③D2.0R細胞相比于D2A1細胞并未顯著富集缺氧相關基因，表明其逃避免疫的方式可能不同于腫瘤團塊內靜息細胞通過上調缺氧信號通路來創建T細胞抑制微環境的方式。④值得注意的是，D2.0R細胞中，作為MHC I復合物的b2微球蛋白(B2m)顯著下調。這一發現與先前研究一致，即在靜息、慢增殖干細胞以及胰腺導管腺癌小鼠肝臟內的單個Ki-67陰性DTCs和乳腺癌患者骨髓吸引物中檢測到的部分細胞，均存在MHC I下調的現象。這些數據暗示著單個、靜息狀態的DTCs可能會通過降低MHC I分子的表達水平，從而避免被免疫系統識別和攻擊。

　　盡管研究提供了證據表明DTC由于與抗原特異性T細胞的交互不足而逃避了免疫介導的消除，但該工作很大程度上依賴于臨床前模型以及高度穿透性的“模型”新抗原(如NY-ESO-1、HA和eGFP)的表達，這些新抗原具有高親和力的TCRs。記錄到的MHC下調水平可能會成為低親和力TCR針對中等表達腫瘤新抗原識別的障礙。發現的另一個有趣方面是，無論施加多少抗原特異性T細胞，總會有少量殘留的DTC持續存在?！跋鄬ο∪薄奔僬f暗示，對它們的監控，或缺乏監控，是隨機的，并且可能需要更高的T細胞數量才能實現。對殘留DTC上的MHC I水平的檢查支持了這一結論。然而，尚未測試這些持久存在的DTC是否比其同類更具免疫抑制性，以及它們是否占據了免疫特權位點。要明確排除后一種可能性，需要采用空間方法進行進一步研究。

　　此外，長期隨訪研究將需要評估在各種依賴T細胞的治療方式下，清除DTC對于無轉移生存率的不同效果。最后，將我們的發現應用于患者環境，依賴于對DTC的高保真捕獲和嚴格的表征分析。目前尚不清楚是否存在DTC特有的(新)抗原，以及在不同患者及單個患者內部它們的同質性或異質性如何。盡管如此，認為這些限制為我們提供了探索人類DTC生物學的機會。預期通過這樣做，將會揭示出免疫療法可以用于消除那些自身無法產生強烈抗腫瘤免疫反應患者的轉移始動細胞庫的全部潛力。

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